Sådan gør du TBE-buffer i 3 enkle trin

TBE buffer er en bufferopløsning bestående af Tris base, borsyre og EDTA (eller Tris-borat-EDTA i alt). Denne buffer anvendes ofte til agarosegelelektroforese i analysen af ​​DNA-produkter, der er resultatet af PCR-amplifikation, DNA-rensningsprotokoller eller DNA-kloningsforsøg.

TBE-buffer er særlig nyttig til adskillelse af mindre DNA-fragmenter (MW <1000), såsom små produkter af restriktionsenzymfordøjninger.

TBE har en større bufferingskapacitet og vil give skarpere opløsning end TAE buffer. TAE-buffer er en opløsning bestående af Tris-base, eddikesyre og EDTA (Tris-acetat-EDTA).

TBE er generelt dyrere end TAE og hæmmer DNA-ligase, hvilket kan forårsage problemer, hvis efterfølgende DNA-rensnings- og ligeringstrin er ment. Med de tre enkle trin, der følger, lær hvordan du laver TBE-buffer. Det bør ikke tage mere end ca. 30 minutter at oprette denne buffer. Sådan er det:

Forbered en lageropløsning af EDTA

En EDTA (ethylendiamintetraeddikesyre) opløsning bør fremstilles på forhånd. EDTA vil ikke gå fuldstændigt i opløsning, indtil pH-værdien er indstillet til ca. 8. 0. For en 500 milliliter stamopløsning på 0,5 M EDTA vejer 93,05 gram EDTA dinatriumsalt (FW = 372. 2). Derefter opløses det i 400 ml deioniseret vand og juster pH med NaOH. Derefter opsættes opløsningen til et slutvolumen på 500 ml.

Forbered en lageropløsning af TBE

Lav en koncentreret (5x) stamopløsning af TBE ved at veje 54 g Tris base (FW = 121,14) og 27,5 g borsyre (FW = 61,83) og opløse begge i ca. 900 ml deioniseret vand. Derefter tilsættes 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) og juster opløsningen til et slutvolumen på 1 liter.

Denne opløsning kan opbevares ved stuetemperatur, men et bundfald vil dannes i ældre opløsninger. Opbevar bufferen i glasflasker og kassér, hvis der er dannet et bundfald.

Forbered en arbejdsløsning af TBE

Til agarosegelelektroforese kan en TBE-buffer anvendes i en koncentration på 0. 5x (1: 10 fortynding af den koncentrerede bestanddel). Fortynd stamopløsningen med 10x i deioniseret vand. Endelige opløste koncentrationer er 45 mM Tris-borat og 1 mM EDTA. Bufferen er nu klar til brug ved kørsel af en agarosegel.

Hvad du behøver

For at lave TBE-buffer skal du kun bruge fire stoffer. De resterende varer på denne liste er udstyr. De fire krævede stoffer er EDTA dinatriumsalt, Tris-base, borsyre og deioniseret vand.

Hvad angår udstyr, skal du bruge en pH-måler og kalibreringsstandarder, hvis det er relevant. Derudover skal du bruge 600 milliliter og 1500 milliliter bæger eller kolber. Afrunding af udstyrets behov er graduerede cylindre og omrøringsstænger og omrøringsplader.

Kontroller lagerbeholdningen på laboratoriet, du skal bruge for at sikre, at du har alt, hvad du har brug for, før du kommer i gang. Intet er værre end at skulle stoppe i midten af ​​at forberede en løsning, fordi du har løbet tør for de rigtige materialer.

Hvis dit laboratorium er i skole eller på dit arbejdssted, skal du kontakte det rigtige personale for at se, at de har alle genstandene på lageret. Hvis du gør det, kan du spare tid og energi til sidst.