Vigtighed af specifik aktivitet i proteinisolering

Specifik aktivitet er et udtryk der anvendes til at måle reaktionshastigheden for et enzym med et substrat.

Specifik enzymaktivitet (specifik aktivitet for kort) er et mål for enzymrenhed og citeret som enheder / mg . Værdien bliver større, da et enzympræparat bliver renere, da mængden af ​​protein (mg) typisk er mindre, men reaktionshastigheden forbliver den samme (eller kan stige som følge af reduceret interferens eller fjernelse af inhibitorer).

Specifik aktivitet: Måle Enzym Kinetics

Som en smule baggrund er enzymer proteiner, der virker som katalysatorer for at reducere mængden af ​​aktiveringsenergi for at en reaktion skal forekomme. Aktiveringsenergi er den energi, der kræves for at få reaktioner "startet", da mange reaktioner ikke forekommer meget hurtigt (eller forekommer i det hele taget), hvis de er termodynamisk mulige.

Enzymer katalyserer specifikke reaktioner på et bestemt sted (kendt som det aktive sted), hvor reaktanterne binder og reagerer for at fremstille produkterne. Substrates har aktive steder, der kun er specifikke for dem, så ingen andre stoffer binder eller reagerer på samme sted. Som en lås og nøgle vil hvert enzym kun katalysere en bestemt reaktion (med nogle undtagelser).

Specifik aktivitet anvendes i proteinisoleringsmetoder til angivelse af procentsatsen for oprensning. Det er vigtigt at kende denne enhed, når du køber enzymer for at angive, hvor meget af det rene enzym du får.

Ved måling af enzymkinetik (reaktionshastigheden for et enzym med et substrat eller en overflade) defineres specifik aktivitet som mængden af ​​substrat, enzymet konverterer (reaktioner katalyseret), pr. mg protein i enzympræparatet pr. tidsenhed.

Et eksempel på specifik aktivitet ville være:

Det isolerede enzyms specifikke aktivitet blev målt til 150 umol / min / mg protein før oprensning og 800 umol / min / mg efter oprensning.

Specifik aktivitet er et vigtigt mål for enzymrenhed. Forskellige partier af et rent enzym skal have de samme værdier, og selv fortynding af en enzymopløsning mange gange vil have identiske specifikke aktivitetsværdier, selv om der vil være forskellige enzymaktivitetsværdier. Dette skyldes, at tælleren (enheder / ml) og nævneren (mg / ml) ved beregning af specifik aktivitet påvirkes ligeligt.

Specifik aktivitet er meget forskellig fra aktivitet, men beregningen af ​​specifik aktivitet er stadig afhængig af aktivitetsværdien. Dette betyder, at den angivne specifikke aktivitetsværdi også vil være afhængig af enzymenhedsdefinitionen.

• Batcher af enzymer, som har lavere end forventet specifik aktivitetsværdi, kan indeholde enzymmolekyler, der er blevet ændret eller blandet med urenheder.

Faktorer der påvirker enzymaktivitet

Det er muligt, at et enzym kan have forskellige målte aktivitetsværdier målt i forskellige laboratorier (det vil sige reelle forskelle i målt aktivitet, ikke tilsyneladende forskelle forårsaget af brug af forskellige enhedsdefinitioner).

Måden, som en analyse udføres på (testmetoden til bestemmelse af enzymernes renhed) vil påvirke de rapporterede aktivitetsværdier. For eksempel er enzymer generelt mere aktive mellem temperaturer på 37 grader Celsius sammenlignet med 20 grader Celsius, så hvis en analyse udføres ved 21 grader Celsius, vil værdierne afvige fra analyserne udført ved en temperatur på 32 grader Celsius (typisk , analyser udføres ved en temperatur mellem 20 og 37 grader Celsius).

Således vil definitionen af ​​enzymenheden udtrykkes bedre som: 1 enhed (U) er mængden af ​​enzym, der katalyserer reaktionen af ​​1 nmol substrat pr. Minut under standardbetingelser.