Sådan laver du en TAE-buffer i få trin

TAE-buffer er en opløsning lavet af Tris base, eddikesyre og EDTA (Tris-acetat-EDTA). Det er historisk den mest almindelige buffer anvendt til agarosegelelektroforese i analyserne af DNA-produkter, der er resultatet af PCR-amplifikation, DNA-rensningsprotokoller eller DNA-kloningsforsøg.

Denne buffer har en lav ionstyrke og lav bufferingskapacitet. Det er bedst egnet til elektroforese af store (> 20 kb) stykker af DNA og skal udskiftes hyppigt eller recirkuleres i længere tid (> 4 timer) gel-runetider.

Med det i tankerne vil du måske overveje flere batcher af bufferen.

I betragtning af at bufferen er nem at lave, og trinnene kan udføres hurtigt, bør det ikke være særlig tidskrævende eller vanskeligt at trække ud ved at lave mere end et parti ad gangen. Ved brug af instruktionerne nedenfor skal det tage kun 30 minutter at lave TAE-bufferen. Sådan er det:

Klargør en stockopløsning af EDTA

En EDTA (ethylendiamintetraeddikesyre) opløsning fremstilles på forhånd. EDTA vil ikke gå helt ind i en opløsning, indtil pH-værdien er indstillet til ca. 8. 0. For en 500 ml stockopløsning på 0,5 M EDTA vejer 93,0 g EDTA dinatriumsalt (FW = 372. 2 ). Opløs i 400 ml deioniseret vand og juster pH med natriumhydroxid (NaOH). Opløsningen opløses til et slutvolumen på 500 ml.

Pisk op en lageropløsning af TAE

Lav en koncentreret (50x) stamopløsning af TAE ved at veje 242 gram Tris base (FW = 121,14) og opløse den i ca. 750 ml afioniseret vand.

Tilsæt forsigtigt 57. 1 ml istsyre og 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0). Derefter justeres opløsningen til et slutvolumen på 1 liter. Denne stamopløsning kan opbevares ved stuetemperatur. PH-værdien af ​​denne buffer er ikke justeret og bør være ca. 8. 5.

Klargør en arbejdsløsning af TAE

Arbejdsløsningen af ​​1x TAE-buffer fremstilles ved simpelthen fortynding af stamopløsningen med 50x i deioniseret vand.

Slutkoncentrationer af opløst stof er 40 mM. Tris acetat og 1 mM EDTA. Bufferen er nu klar til brug ved kørsel af en agarosegel.

Hvad du behøver for bufferen

Da TAE-bufferen kun kræver et hurtigt og enkelt sæt instruktioner, er mængden af ​​materialer, der er nødvendige for det, ikke overdrevet. Du skal bare bruge EDTA dinatriumsalt, Tris base og iseddikesyre.

Foretagelse af bufferen kræver også en pH-måler og kalibreringsstandarder, alt efter hvad der er relevant. Du skal også bruge 600 milliliter og 1500 milliliter bæger eller kolber samt graduerede cylindre. Endelig skal du bruge deioniseret vand, omrøringsstænger og rørplader.

Indpakning

Hvor skal du lave bufferen - på en skoleplads, et arbejdssted eller et andet sted, f.eks. Dit hjem?Kontroller oversigten, før du begynder at sikre, at du har alle ovenstående materialer til TAE-bufferen.

Hvis du hellere ikke skal betale for materialer, anbefales det at vælge bufferen uden for dit hjem. Du kan nemt bestille de materialer, du har brug for online eller besøge en specialbutik til dem.