Hvordan man laver phosphatbufferet saltvand (PBS)

PBS (phosphatpufret saltvand) er en almindeligt anvendt puffer til immunhistokemisk farvning og anvendes almindeligvis i biologisk forskning. Osmolaritet og ionkoncentrationerne af opløsningerne svarer til menneskets krop (isotonisk).

PBS er en vandbaseret saltopløsning indeholdende natriumhydrogenphosphat, natriumchlorid og i nogle tilfælde kaliumchlorid og kaliumdihydrogenphosphat.

Immunfluorescensfarvning til IHC

Immunofluorescerende farvning var den første immunhistokemiske (IHC) farvningsmetode. Med grundligheden af ​​antigen-antistof bindingsreaktion bliver antigener synlige ved anvendelse af fluorescensfarvestoffer, når de er konjugeret med antistoffer. Processen sker, når den aktiveres af spændende lys af en specifik bølgelængde under et fluorescerende mikroskop. Immunohistokemi refererer til processen med at detektere antigener (f.eks. Proteiner) i cellerne i en vævssektion ved anvendelse af antistoffprincippet, der binder specifikt til antigener i biologiske væv.

Anvendelser af fosfatbuffet saltvand (PBS)

Fosfatbufret saltvand har mange anvendelser, fordi det er isotonisk og ikke-toksisk for de fleste celler. Det kan bruges til at fortynde stoffer og bruges til at skylle containere indeholdende celler. PBS kan bruges som fortyndingsmiddel i metoder til tørring af biomolekyler, fordi vandmolekyler indenfor det vil blive struktureret omkring stoffet (for eksempel protein) at blive "tørret" og immobiliseret til en fast overflade.

Den tynde film af vand, der binder til stoffet forhindrer denaturering eller andre konformationelle ændringer. Carbonatbuffere kan anvendes til samme formål, men med mindre effektivitet. PBS kan også bruges til at tage et referencespektrum ved måling af proteinadsorptionen i ellipsometri.

Fremstilling af PBS

Der er mange forskellige måder at forberede PBS på.

Nogle formler indeholder ikke kalium, mens andre indeholder calcium eller magnesium. Bufferopskriften nedenfor, som er forholdsvis let, er for 10X PBS stamopløsning (0. 1M). Der er også mulighed for at tilføje Tween. Hele processen tager cirka 10 minutter.

Hvordan man laver fosfatbufferet saltvand (PBS)

1. Vægt: 10. 9 g vandfrit natriumfosfatdibasisk (Na2HPO4), 3. 2g vandfrit natriumphosphatmonobasisk (NaH2PO4) og 90g natriumklorid (NaCl).
2. Opløs alle ovenstående i lige under 1 liter destilleret vand.
3. Indstil pH til 7. 4.
4. Gør opløsningen op til et slutvolumen på 1L.
5. (valgfrit) Til en opløsning indeholdende 0,5% Tween 20 tilsættes 5 ml Tween 20 til 1L opløsningen.
6. Fortynd 10X før brug og juster pH om nødvendigt.

Tips til oprettelse af PBS Buffer

• Opbevares ved stuetemperatur.
• Ikke-vandfrie reagenser kan erstattes, men du skal genberegne den passende masse af hver for at rumme de tilsatte vandmolekyler.

Hvad du behøver at lave PBS-buffer

• Natriumfosfat, monobasisk (vandfrit)
• Natriumfosfatdibasisk (vandfri)
• Natriumchlorid
• Skale- og vejebåde
• Magnetisk omrører og omrøringsstang > pH-probe, kalibreret og passende opløsninger til justering af pH
• 1L volumenkolbe
• Tween 20 (valgfrit)